HTR8-S/Vneo人绒毛膜滋养层传代细胞

【细胞货号】 C0630

"选择正确的培养基:不同的细胞可能培养基不同,甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞,有文献用neurobase培养基,而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而这种培养基中含有抗氧化剂成分,此时,我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。

瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃冰箱全溶后再分装,在溶解过程中须规则摇晃均匀小心勿造成气泡,使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后,将血清放入,待温度升高到56℃后计时,一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须,一般不要作此热处理,因为会造成沉淀物之显著增多,HTR8-S/Vneo人绒毛膜滋养层传代细胞且会影响血清之品质。注意更换新血清包括不同批次对细胞的影响。【细胞缩写】" HTR8-S/Vneo细胞

【细胞名称】 HTR8-S/Vneo(人绒毛膜滋养层细胞)

【背景资料】 见细胞说明书

【细胞来源】 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系

【代次】 P4

【规格】 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管(两支)

"细胞冻存及复苏基本知识普及:

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。

除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜DMSO,可使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内水分透出,减少了冰晶形成,从而避免细胞损伤。 

采用""慢冻快融""的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min,当温度低于-25℃时可加速,到-80℃之后可直接投入液氮内-196℃。【细胞数】" 110(6)

【生物安全级别】 1

【生物体】 人

【组织来源】 滋养层

【细胞形态】 上皮样

【细胞特性】 贴壁

【细胞活力】 95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)

【细胞检测】 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

"细胞常规培养传代流程请严格遵照无菌操作

1、吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞注意把握消化时间,通常控制在1-2min

2、镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时不建议消化到细胞漂浮去掉胰酶,加6-8ml完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散

3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养

4、注意培养基PH值变化情况,定期换液每周2-3次,待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

特别注意:如使用公共实验室或者初次接触细胞培养,建议添加双抗培养

1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清,原瓶培养基的继续使用时间长不宜超过72小时

2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化,请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代,请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养

3、如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。【培养条件】" 详见细胞说明书

【传代方法】 建议1:2-1:3 两天换液一次

【冻存条件】 详见细胞说明书

【主要文献】 请具体查阅相关发表文章

细胞培养三不要:

养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下:

1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子,觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑知道为什么吗烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候,炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后,空气变冷,压力骤降,培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳,释放出来。培养基中的碳酸少了,当然会变碱。如果不烧瓶口的话,你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。(当然多多少少还是会有一点越用越碱,HTR8-S/Vneo人绒毛膜滋养层传代细胞因为室温还是比冰箱内的温度高)

其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下,你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话,这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌,除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更彻底,超净台内根本就不点酒精灯。

2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言,养细胞就像养孩子一样,有空就要去看看。细胞越是养不好,就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处,特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后,密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围,形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞,培养瓶这么一晃,把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞,细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管,细胞疯长。

3. 不要怕消化。在传代的时候,初学者往往生怕细胞消化过度,早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯,吹得满瓶子都是气泡。在我看来,用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候,37度消化过夜,细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有,动作要轻柔,尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的机械应力相当大,对细胞的伤害也是很大的。

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