KU-812复苏细胞株 "

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培养细胞的冻存及复苏:

细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中,储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。

1. 冻存细胞

(1)选对数增生期细胞(证明无支原体污染),在冻存前1d换液。

(2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达510/ml左右密度,离心,去上清。

(3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO)或甘油,可使冰点降低,使细胞内水分在冻结前透出细胞外。

(4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m悬液。

(5)旋好冻存管并仔细检查,一定要盖紧,做好标记。

(6)冻存:在特殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min时间内,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。

操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。

2.复苏细胞

(1)从罐中取出冻存管。

(2)迅速放入36℃~37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成。

(3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10ml培养液。

(4)低速离心(500~1000r/min) 5min,去上清后再用培养液洗一次。

(5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。

冻存细胞数量要充分,密度应达到10/ml,在融后稀释20倍时,仍能保持510/ml数量。" KU-812复苏细胞株 "

TIB-162 HuT 102贴壁培养细胞株

CRL-2088 CCD-1072Sk贴壁培养细胞株

CCL-210 CCD-19Lu贴壁培养细胞株

CRL-2122 CCD-1095Sk贴壁培养细胞株

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CCL-202 CCD-11Lu贴壁培养细胞株

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HTB-180 NCI-H345 [H345]贴壁培养细胞株

HTB-18 Y79贴壁培养细胞株

CRL-2090 CCD-1074Sk贴壁培养细胞株

CRL-8021 OKT 9贴壁培养细胞株

CRL-5864 NCI-H1341 [H1341]贴壁培养细胞株

CRL-5898 NCI-H1836 [H1836]贴壁培养细胞株

CRL-2106 CCD-1090Sk贴壁培养细胞株

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CRL-5932 NCI-H2196 [H2196]贴壁培养细胞株

CRL-5866 NCI-H1373 [H1373]贴壁培养细胞株

TIB-161 HuT 78贴壁培养细胞株

CRL-8013 OKT 5贴壁培养细胞株

CRL-5895 NCI-H1792 [H1792]贴壁培养细胞株

CCL-138 Detroit 562贴壁培养细胞株

CCL-227 SW620 [SW-620]贴壁培养细胞株

CRL-2104 CCD-1087Sk贴壁培养细胞株

CRL-8016 OKT 5贴壁培养细胞株

CCL-2.1 HeLa 229贴壁培养细胞株

CCL-81 Vero贴壁培养细胞株

CRL-2172 SW 1990 [SW-1990, SW1990]贴壁培养细胞株

HTB-40 HuTu 80贴壁培养细胞株

CCL-257 NCI-H1688 [H1688]贴壁培养细胞株"