1、PCR实验室平面布局:

　　在原则上,pcr试验实验室分为四个独立的工作区:试剂储存和制备区、试样制备区、放大反应混合物配制和放大区、放大产物分析区。为了避免交叉污染,进入每个工作区必须严格遵循出入的方向,即只从试剂储存和制备区试样制备区放大反应混合物配方和放大区放大产物分析区。

　　2、个实验室空调通风系统的设计与压力控制

　　pcr实验室没有严格的净化要求,但为了避免各个实验区之间交叉污染的可能性,建议采用全气流组织形式。同时,要严格控制空气的输送和排放比例,保证各试验区的压力要求。

　　2.1 pcr试剂储存和制备区

　　实验区的主要操作是制备贮存试剂、分离试剂和制备主要反应混合物。用于样品生产的试剂和材料必须直接运到该地区,不得通过其他地区。试剂的原料必须存放在该区域,所需的存储试剂必须在该区域制备。

　　这一地区对气流压力的控制没有严格的要求。

　　2.2 pcr试样准备区

　　该区域主要用于样品的保存、核酸(rna,dna)的提取和储存、扩增反应管的加入以及dna的合成。

　　该区域的压力梯度要求为:相对于邻近区域的正压力,以避免从邻近区域进入该区域的气溶胶污染。此外,由于在取样过程中可能发生气溶胶污染,应避免不必要的气体在该区域周围行走。

　　2.3放大混合物配方和增强区

　　该区域主要是作为dna放大操作。此外,在这一地区还可以添加准备好的dna模板(来自样品制备区)和将主要反应混合物(来自试剂储存和制备区)制备成反应混合物。

　　该区域的压力梯度要求是相对于邻近区域的负压,以防止气溶胶泄漏出该区域。为了避免气溶胶污染,应尽量减少该地区不必要的移动。个别操作,如取样,应在超清晰表中进行。

　　2.4放大产品分析领域

　　该区域主要用于测定放大后的碎片。

　　这个地区是添加剂污染的主要来源。因此,这一区域的压力梯度必须是相对于邻近区域的负压,以防止放大产物从这一区域扩散到其他区域。

　　PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区标本制备区扩增反应混合物配制和扩增区扩增产物分析区。

　　2实验室空调通风系统设计及压力控制

　　PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区。

　　2、压力要求。

　　2.1PCR试剂贮存和准备区

　　该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。

　　对与气流压力的控制,本区并没有严格的要求。

　　2.2PCR标本制备区

　　该区域主要进行的操作为样本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。

　　本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。

　　2.3扩增反应混合物配制和扩增区

　　该区域主要进行的操作为DNA扩增。此外,已制备的DNA模板 (来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。

　　本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。

　　2.4扩增产物分析区

　　该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。

　　本区是主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。

　　3、预防和控制污染

　　pcr实验室设计的中心问题是如何避免污染。在实践中,常见的污染类型有:放大产物的污染;天然基因组dna的污染;试剂的污染和标本之间的污染。一旦污染发生,实验必须停止,直到找到污染源,实验结果必须失效,实验必须重新进行。因此,在污染发生后在实验室周围寻找污染源不仅费时费力,而且浪费人力物力。因此,为了避免污染,预防应该是步,而不是消除。

　　3.1严格划分工作领域

　　(一)各试验区设置合理;

　　(2)每个实验区必须有明显的标记(如醒目的房标或不同的地色等),以避免不同实验区的设备项目和试剂混淆。

　　3.2合理的系统设置

　　(一)合理设置空调通风系统,尽量采用全交付式空调系统;

　　(2)严格的气流压力控制,以确保不同试验区的不同压力要求。

　　3.3规范的操作

　　(一)扩增实验室技术人员必须接受诱导培训,并通过培训,方可进行临床基因扩增试验;

　　(2)在实验操作过程中,操作人员必须戴上手套并经常更换。另外,操作中使用一次性帽也是防止污染的有效措施;

　　(三)清洁工作及时、正确。实验工作结束后,该地区必须立即清理。除常规消毒液擦拭表面或紫外线灯照射消毒外,部分实验设备还应进行高压消毒处理。

　　3.4严格管理

　　(一)严格控制人员进出实验室。与实验无关的人不得随意进出实验室。在条件允许的情况下,必须设置独立的通道和门,进出整个试验区;

　　(2)尽量减少在实验区不必要的移动的可能性,以减少交叉污染。

　　(三)放大产物分析区是放大产物的主要污染源。废液不能倾倒在实验室,必须用消毒剂消毒,放在指定的位置处理。用过的吸头和其他一次性材料,也应在浸泡后统一消毒焚化处理;

　　(四)放大产品分析领域可以使用某些诱变和有毒物质。应特别注意实验室人员的安全保护。

　　3.5适当的实验室设施

　　完整的实验室设施是保证实验工作的必要条件。设备和仪器应根据每个实验室实验的内容配备,如超清洁工作台、离心机和采样器。

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